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專題報導

2012 第一季

分子生物
探索 RNA 新世界


Non-coding RNA (ncRNA) 泛指不轉譯蛋白質的 RNA (non-mesenger RNA),一般熟知的包括 rRNA、tRNA 及 snRNA 等皆屬 ncRNA。但近年來 Non-coding RNA 的研究如雨後春筍般的冒出,逐漸變成研究熱點的原因是發現其他的 noncoding RNA 具有調節基因功能的能力。這群 regulatory RNA 包括 small non-coding RNA (microRNA、siRNA、piRNA 等) 及 long non-coding RNA (LncRNA)。其中 small RNA 的研究較為成熟,功能及分子機轉也較為清楚。但除了 small RNA 具有調節基因表現的功能之外,另外一群 LncRNA 的功能愈來愈受到重視。但 LncRNA 的研究才剛剛起步,生理功能及調控的分子機轉仍然需要更進一步探討。


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細胞免疫
氧化壓力~老化、神經退化殺手


氧化壓力被指出和神經退化性疾病的發病機制、癌症、細胞凋亡、心血管疾病和衰老有關。氧化壓力的發生是由於氧化物的增加,和抗氧化物的降低,或修復氧化損傷能力的喪失所引起。活性氧 (Reactive Oxygen Species, ROS) 包括一氧化氮 (NO),超氧離子 (O2-),過氧亞硝基陰離子 (ONOO-) 和氫氧自由基 (OH-)。ROS 可以被細胞裡的超氧化物歧化酶 (SOD) 和過氧化氫酶 (catalase) 及過氧化物酶 (peroxidases) 所清除。


 

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2011 第三季

分子生物
iDimerize Technology~開啟蛋白質研究無限的可能


大部份細胞內重要訊號傳遞過程,需要藉由蛋白質的多聚體化才能完成 (Dimer, Trimer, Tetramer 等等),例如細胞膜上的受體、轉錄因子以及人體 7 成以上的酵素,都能形成多聚體。其中以同質性雙聚體 (Homodimer) 佔的比例最高,其次為異質性雙聚體 (Hetrodimer)。而 iDimerize 技術可以自由的操作目標蛋白的多聚體化,進而控制特定訊號傳遞路徑的活化,甚至影響蛋白質分佈及交互作用等。除了訊號傳遞,iDimerize 技術也可以利用控制轉錄因子的聚合,進而達到調控基因的目的,或控制蛋白質的分泌等。
 

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細胞免疫
細胞生長調控研究~分析 Cell Cycle、Cell Proliferation 武功秘笈


Cell Proliferation 是指細胞生長、分裂導致細胞數目變多;可藉由細胞週期(cell cycle) 來調控。在原核細胞,cell cycle 主要藉由分裂生殖(binary fission) 來完成;在真核細胞,cell cycle 主要可分成兩個階段:
1. 間期 (Interphase):
在此時期,細胞生長、累積進行有絲分裂所需要的養分及複製DNA。
2. 分裂期 (Mitosis Phase):
細胞在這個時候,分裂成兩個子細胞。藉由cell cycle,生物體可以由單一受精卵變成一個成熟的個體。並且藉此,生物體可以在生長發育時,更新毛髮、皮膚、血球及一些器官和組織。

 

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2011 第二季

分子生物
SMART Technology 及應用


真核細胞的 mRNA 相當有特色,頭 ( 5 端) 有 Cap,尾 ( 3 端) 有 poly(A) Tail。而尾端的 poly(A) Tail 即成為反轉 cDNA 的基礎。但如何獲得完整的 5 端序列即是一大難題。最常見的合成方式即是在 RNA 兩端均接上Adaptor,或者利用 DNA 轉移酶在 cDNA 合成完畢後,再加上一串的 C,再利用 Oligo-d(G) 合成 5 端序列。
但是這些方法存在著許多問題,例如:RNA 處理的步驟很多,容易造成 RNA 的降解或斷裂;RNA Ligation 效率很低,導致損失許多基因資訊,特別是 Low-copy number 基因。並且無法區分出完整或不完整的 RNA 序列。而 Clontech 專利推出的 SMART 技術完完全全突破以往的限制,讓操作者在單管反應中,即可完成反轉、合成 5 端 Adaptor 的步驟,不但不需額外進行純化,所需要的 RNA 樣本很少,這些都是其他方法無法相比的。
 

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細胞免疫
Stem Cell Resource


幹細胞研究是當代生物學中最吸引人的領域。 在身體發育的早期,幹細胞有明顯的潛能會分化成不同種類的細胞。除此之外,在許多組織內,幹細胞也可當做是內部修補系統。
幹細胞跟其他種類的細胞不一樣,主要因為它有兩個重要的特性:1. 自我更新(Self-renewal): 幹細胞是種非具專一性的細胞(unspecialized cells)。在細胞分裂、一分為二的時候,一個子細胞還是原來的幹細胞,另一個則會變成具有特殊功能的其他種類細胞,例如肌肉細胞、紅血球或腦細胞。2. 在某些情況下,幹細胞會被誘導分化成具專一性、特殊功能的細胞。在一些器官,例如,腸胃跟骨髓,幹細胞會分化來修補取代受損的組織;在其他器官,例如,胰臟或心臟,在某些特殊情況下,幹細胞才會分裂。

 

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2011 第一季

蛋白質表現、純化及樣品製備的超級陣容

陣容1. 蛋白質表現系統 2
陣容2. Co2+、Ni2+ 幫您純化 His-Tag 蛋白 7
陣容3. 樣品製備的好幫手
 

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2010 第四季

神奇的魔術師 ~ProteoTuner™ Systems

Dr. Thomas Wandless 的研究團隊在 2006 年 Cell 期刊上發表了一篇用「利用小分子化合物直接調控蛋白質表現」的文章。作者利用FBKP12 蛋白其中的一小段 peptide,其帶有 Proteasome 辨認序列,極易經由 Proteasome 作用而水解,此稱為 DD (Destabilizing Domain)。把 DD 作為 tag,表現 DD-fusion protein,再利用 DD 小分子 Ligand — Shield1 具有遮敝 DD-Protein 特性;有 Shield1保護的目標蛋白可以避免被水解破壞,失去 Shield1 保護的目標蛋
白會快速的被降解。如此顛覆了傳統耗時的基因調節方式,讓蛋白質調控的速度在數小時內即可達到。
 

■ ProteoTuner System,從蛋白質層面調控蛋白質的表現

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2010 第三季

癌症研究工作室

腫瘤細胞一直研究癌變機理、抗癌藥效、及癌變生成因子最重要的對象。腫瘤細胞的研究手法有很多種,最常見的是取癌變組織分析,但無法有效分離癌細胞或正常細胞,其結果令人質疑。其他如 LCM 方法取得癌病變區的樣品再進行分析,僅適用於石蠟包埋的組織,所得到的樣本,只能進行簡單的核酸分析,但由於核酸分離的成效、品質都差,導致分析結果常令人無法確信。而最好的方式當然是自新鮮組織的樣品中分離癌細胞株,並加以培養,如此就能有源源不絕的癌細胞可供後續的蛋白質或核酸分析,唯有效自新鮮組織分離癌細胞株需要專業技術的加持以及長時間的建立。那麼,我們如何自「新鮮組織」中分離出腫瘤細胞呢 ? 首先,我們必須先了解腫瘤細胞的特性。
 

■ 腫瘤細胞的生物學特性
■ 分離腫瘤細胞
■ 癌症特性檢驗

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2010 第二季

Epigenetics Research 特輯

Epigenetics 為專門針對基因的修飾機制所進行的研究,在不影響基因序列的情況下,達到調控基因表現,影響生物表現型 ( phenotype ) 差異的一門科學。
目前 Epigenetics 的研究主要分成三大類﹕
1. Histone modification ﹕
目前研究 histone modification 包括 acetylation 、phosphorylation 、methylation 以及ubiquitination。研究發現 histone 不同位置的胺基酸被甲基化,可正向或負向調控基因的表現;而當 promoter 區域的histone 被 acetylation 則會促進基因的轉錄。目前認為 histone modification 與 DNA 轉錄 、修復、重組、複製息息相關並會影響染色體結構。
2. DNA methylation ﹕
研究發現 DNA 甲基化可以調控 DNA 轉錄,特別是 CpG islands 在活化的基因中與 transcriptionstart sites、promoter 相關。因此一般認為 CpG islands 甲基化與基因表現,人類癌症發展具有相關性。
3. Non-coding RNA ﹕此為一個新興的研究領域,non-coding RNA 包括了 microRNA、 small RNA、large RNA 以及pi-RNA 。目前研究發現 non-coding RNA 亦參與影響基因的轉錄與轉譯的表現。
 

■ Histone modification
■ DNA methylation
■ Non-coding RNA

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2010 第一季

幹細胞 專輯

幹細胞在生命體由胚胎發育到成熟個體的過程中,扮演最關鍵性的角色,即使發育成熟之後,一般相信幹細胞仍然普遍存在於生命體中,擔負著個體的各個組織及器官的細胞更新及受傷修復等重責大任。
1998 年美國威斯康辛大學的 James Thompson 以及 Johns Hopkins 醫院的 John Gearhart 兩位教授,成功地將人類多功能性 (pluripotent) 的胚胎幹細胞 (embryonic stem cell) 在體外培養與繁殖,開啟了全球對於幹細胞研究的熱潮。經由許多實驗的證明,這些多功能性的幹細胞,在體外確實能夠分化成為人體二百多種器官與組織的細胞,無論是學界及醫界,均肯定其未來在器官與組織的移植、新藥開發、基因療法、治療癌症等方面具有無限的發展潛力。
 

■ 幹細胞的培養
■ 製備 iPS cell
■ 幹細胞的分析
■ 幹細胞表面抗體大蒐集

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2009 第四季

高效基因轉殖解決方案

基因轉殖技術是一個相當普遍被生醫領域研究者所使用的一項技術。其目的是表現基因,進而研究基因的功能,了解整個調控機轉,最終應用於促進世界福祉上。而一般大家所謂的「基因治療」一詞,原指的是把一段外源性的 DNA 殖入病患體內,進行外源基因表現而補償病患體內所缺失的基因功能,以達到基因治療的功能。但隨著科學的發展,基因治療一詞已不僅僅使用於 DNA 序列上,更擴及到 RNA 上,例如 Anti-sense RNA 或是 siRNA 等。

而欲把外源性基因殖入生物體內的方法,統稱為基因轉殖。一般說來,目前基因轉殖技術可分為: (1) Non-viral delivery及 (2) Viral delivery。
(1) Non-viral delivery:包括 cationic liposome,electroporation,calcium phosphate precipitation 等等,但由於效率、存活率及 in vivo 的適用性讓許多研究者考慮其他高效的基因轉殖方法。例如使用目前最高效非病毒轉殖的方式為 Nucleofection,以及在 Stem cell 上有驚人成果的 bio-degradable nanoparticle – Xfect Stem。
(2) Viral delivery:重組病毒系統以轉殖效率高、表現量高且可以持續性表現並且隨著世代複製而受到重視。
缺點在於其重組病毒有可能活化的潛在危險性,但重組技術隨著時間日新月異,在重組病毒的安全性上皆設定了重重的關卡,使病毒複活的機率微乎其微。目前常使用重組病毒系統包括︰ (A) Adenovirus,(B) Retrovirus,(C) Lentivirus 等。
 

 

 

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2009 第三季

 

 

CD Marker 免疫篇 Part 1  


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2009 第二季

純化幹細胞

近來的幹細胞生物學,著重在如何將幹細胞(pluripotent stem cells)應用在治療上以及更加了解幹細胞在正常以及致病
的機轉為何。就現今目前所知道的,再加上對於胚胎發育、成人以及幹細胞持續不斷地研究,都有助於研究人員更
加了解我們的幹細胞是如何分化成許多不同的細胞種類。因此,擁有可將不同細胞做不同分類的儀器,將有助於同
源細胞群的分離以及分類。關於如何純化以及分離血球幹細胞方面,已有商業化的系統以及試劑來達成此目的。BD
Bioscience,有超過25年的經驗支援幹細胞的研究,現今,BD Biosciences將提供不同於以往的成套儀器,包括流式細
胞儀,多種呈色的試劑,細胞培養的耗材和用品以及生物影像系統都將有助於研究的發展。這整套的儀器結合了最先
進的技術以及我們將提供世界級的服務支援研究了解幹細胞的分析,培養以及純化。

 

如何有效純化幹細胞?

如何有效確認及分析幹細胞族群?

找尋各類幹細胞marker完整收錄?


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BD Human Pluripotent Stem cell

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2009 第一季

Apoptosis 37週年紀念特輯

細胞的告別式

凋亡一詞是1972年由澳大利亞病理學家John Kerr首先提出來,本意是花瓣或是樹葉從花或樹上掉落或凋落。而Kerr借用他來描述一種特殊類型的死亡。凋亡細胞最特別的型態特徵是胞核染色質的降解,染色質會聚集於核膜下,成緻密的團塊狀,在一般或電子顯微鏡下觀察可見。染色質的濃集可能是細胞核內DNA裂解的結果,DNA雙鏈發生裂解,先形成約300bp大
小的片段,爾後再進一步裂解成180-200bp的核小體,此小体是細胞凋亡的特異性標誌。在尚未形成核小體之前,凋亡細胞會有喪失微絨毛、偽足等胞膜結構,細胞變圓等外觀上的變化; 隨後,細胞會皺縮,胞質濃縮,最後細胞會裂解形成凋亡小體,被巨噬細胞識別並清除之。這種死亡的過程中,不發生胞器及胞膜的破裂,沒有內含物的外泄,故不引起癌症反應及周圍組織的次級損害。more...

 

BD Annexin V- 細胞膜PS外翻

Annexin V是一種Ca++依賴的磷酯結合蛋白,最初發現是
一種具有很強抗凝血特性的血管蛋白。Annexin V具有易
與磷酯類(如PS)結合的特性,對PS有高度的親合性。因
此該蛋白可作為一敏感的探針來檢測暴露在細胞膜表面
的PS (如圖所示)。然而PS轉移到細胞膜外不是凋亡所獨
特的,也可以發生在壞死細胞上。兩種細胞死亡方式間
的差別是在細胞凋亡的初始階段細胞膜是完好的,而壞
死的細胞在其早期階段細胞膜的完整性就遭到破壞。因
此Annexin V檢測法多搭配7-AAD或PI 染料,因為活細胞
或是細胞膜完整的細胞可將染料排斥在外,達到分辨壞
死細胞與凋亡細胞目的。more...

BD MitoScreen JC-1 粒線體膜電位變化

越來越多的證據顯示,Mitochondria在細胞凋亡的過程中扮演重要的角色,其中早期証據之ㄧ在於粒線體膜電位的改變,去極化的過程(depolarization)會增加細胞膜的通透性並使膜內的蛋白,如Cytochrome C, AIF,Smac/DIABLO等分子釋放到細胞質中,並引發Procaspase-9的活化,造成一連串凋亡的反應。BD提供粒線體特異性染料JC-1,可以來反應粒線體負電性的高低。JC-1有兩種不同的存在形式,分別為單體(Monomer)或多聚體(Aggregates),在正常生理狀態下,粒線體負電性高,JC-1多以多聚體存在,發散出且紅且綠的螢光,在FL2可以偵測到大量表現。JC-1多聚體型態是可逆的。當走向凋亡時,粒線體去極化產生,負電性降低時,則以單體存在,在FL1可以觀察綠色螢光的增加。more...

 

Clontech ApoAlertTM pDsRed2-Bid more...

■ 紅色螢光蛋白與Bid 形成fusion protein,藉此觀察 Bid (pro-apoptotic protein) 在單一細胞中的位置變化。
■ Cell-based assay
■ 簡單、精確,可配合其他螢光觀察
■ 亦可搭配流式細胞儀分析。more...

 

Clontech ApoAlertTM Glutathione Detection

■ 檢測apoptosis 細胞內氧化還原的改變。
■ 簡單、可應用在96 - well format。more...

Clontech ApoAlertTM Cell Fractionation

■ 快速檢測cytochrome c 是否粒線體釋放至細胞質中
■ 方便,不需要超高速離心 more...

BD DNA Fragmentation Assay DNA片段化

細胞凋亡時,DNA被內源性核酸內切脢降解,產生帶有3’末端的切口、或斷裂DNA片段,在TdT作用下使標有螢光色素的特殊的核酸如FITC-dUTP,連接到DNA片段的3’末端,螢光強度與DNA片段含量成正比,根據螢光強度對凋亡細胞做出定量分析。該方法亦可配合PI染色進行雙參數分析,除了可得知檢體中凋亡細胞百分比,亦可同時瞭解凋亡細胞所在的細胞週期(G0/G1,S,G2/M)。more...


2008 第四季

Cancer Research 工具大集合

前言
腫瘤細胞一直是研究癌變機制、抗癌藥效、及癌變生成因子最重要的對象。腫瘤細胞的研究手法有很多種,最常見的是取癌變組織分析,但無法有效分離癌細胞或正常細胞,其結果令人質疑。其他如LCM 方法取得癌病變區的樣品再進行分析,僅適用於石蠟包埋的組織,所得到的樣本,只能進行簡單的核酸分析,但由於核酸分離的成效、品質都差,導致分析結果常令人無法確信。而最好的方式當然是自新鮮組織的樣品中分離癌細胞,並加以培養,如此就能有源源不絕的癌細胞可供後續的蛋白質或核酸分析,唯有效的自新鮮組織分離癌細胞株需要專業技術的加持以及長時間的建立。

 

SeaPlaque Agarose

Soft agarose cloning Soft agar 指的是半固狀的凝膠,正常的細胞必需貼附基底生長,而具癌化傾向的細胞,可以在半固狀的凝膠中懸浮生長,待細胞長成似菌落大小般時,可以簡單的用
Tip 或其他工具將colony 挖起來。細胞隙相黏緊密的,可能要用typsin 作用,將細胞打散,細胞間隙鬆散的可以pipette 直接打散。繼以培養。而Agar 是由中性的Agarose 及酸性的Agaropectin 所組成。其中常用的Agarose 含極少量的ester sulfates,其凝膠強度高,並且除去可能干擾細胞生長的其他鹽類,較合適細胞培養用途。至於半固狀的Agar,可以利用低熔點的agarose 配製,

例如LONZA 公司生產的SeaPlaque 就是一個純度高,熔點低的agarose。

Angiogenesis Ab Array

將許多與Angiogenesis 相關蛋白的抗體點在膜上,一次可以screen 多種angiogenesis 蛋白的表現量, 如ELISA型式般,簡單又好操作。
■ 高敏感度:可測得pg/ml 的蛋白
■ 適用樣品範圍廣泛:Cell lysate、plasma、tissue、lysate、conditioned media 皆可以使用
■ 非放射性偵測:以HRP 冷光呈色,可在CCD Camera上測偵,或是底片顯影。
■ 每個蛋白點有兩重覆,結果更可信。
■ Human array 可測得19 個蛋白,Mouse array 可測得18 個蛋白。

 

Cancer cell isolation kit

利用癌細胞易聚集成塊的特性,在靜置的過程中,聚集
成塊的癌細胞因為比重變大而落於管底的位置。
■ 市面唯一可以從新鮮切片的樣品分離出癌細胞產品
■ 快速建立primary cell lines
■ 分離出的細胞應用廣泛-- genetic analysis, biomarker
identification 等。

 

Premixed WST-1 Cell Proliferation Reagent

■ 精確:細胞酵素代謝活性與細胞數量息息相關
■ 方便:馬上可用。
■ 安全:沒有放射性物質,沒有有機溶劑
■ 完全水溶:不用再用DMSO 回溶結晶
■ 可反覆測定:WST-1 對細胞無毒性,因此可置入Incubator,方便找到最佳的偵測時間。
■ 血清及酚紅對實驗結果沒有明顯影響。

 

Millicel Inserts

■ 圓柱型加高設計,邊緣無開口,內外培養液不易相混,避免造成實驗誤差。
■ 單顆無菌包裝,自由調整使用量,節省成本。
■ 三端不對稱懸掛式設計,方便更換培養液及藥物的添加。

■ 根據不同應用可選擇不同的孔徑大小。
■ 另有站立式Millicell,提供PCF、MCE 、PTFE材質任君選擇。
■ 24 well 及96 well盤式Millicell方便大量培養使用。

Matrigel for Angiogenesis

Matrigel 由Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma
純化出來,是理想細胞基質的配方,不但擁有豐富的ECM 蛋白,更含有生長所需的因子,在室溫的狀態下,能聚合成具有活性膠狀物質,是模擬細胞生長環境最佳的選擇。而血管新生的過程中,內皮細胞會分泌酵素分解ECM裡面的Collagen IV,造成細胞的遊走,經一連串的增生分化,最後形成管狀般的血管構造。Matrigel 已被証明可在In vitro 的模式中引起在以HUVEC血管新生。此外,也可應用於In Vivo 的方式,以Plug assay 的方式,將Matrigel 打入小鼠皮下,形成Matrigel Plug,可輕易以手術的方法取出,觀察血管新生的情形。
特點:

In Vivo study
■ 促進腫瘤在裸鼠體內生長速度
■ 利於觀察與研究體內腫瘤血管新生情形

In Vitro study 特點:
■ 專利coating 技術,使Matrigel 均勻分佈,實驗再現性極高
■ 高透明度之96well盤底,便於取得清晰之血管分佈影像,而有較準確之數據分析結果
■ 透過自動影像偵測系統,可快速獲取數據
■ 本血管新生產品,僅偵測血管長度作為血管新生的參考值.

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2008 第三季 

Discovery 探索生命的起源 The Promise of Stem Cell Research

淺談幹細胞

近年來,幹細胞的研究掀起一股熱潮,幹細胞迷人之處在於其獨特的能力-自我更新、自我增值,多向分化成
各種細胞組織的能力,這些青春不老又有活力的細胞帶給科學家無限的想像,帶動再生醫學,組織工程,老人
醫學的研究。對於新藥或毒物篩檢上,也提供一個絕佳的測試平台。有鑑於幹細胞所蘊含的醫療價值與龐大商
機,越來越的生技公司投入幹細胞的研究。
幹細胞主要可以分成胚胎幹細胞與成體幹細胞兩大類,胚胎幹細胞,來源自胚胎,又稱為全能細胞,可分化為
任一種細胞或是組織。成體幹細胞則發現於成人的器官或組織中,像是骨髓、周邊血,肝臟等等器官都可發現
他們的蹤跡。相較於胚胎幹細胞,成體幹細胞的分化能力則受到局限,能分化的細胞或是組織種類較少。然
而,胚胎幹細胞受限其倫理上的考量,使得成體幹細胞的研究有很大的進展。臨床上已可以使用造血幹細胞來
治療白血病、地中海貧血、黏多醣症等疾病,近年來,更有臍帶血銀行的設立,專門保存造血幹細胞。也有許
多生技公司,將分化後的細胞與生物可分解性材料結合,應用於軟硬骨的修復、心肌或肌腱的再生等,或是
出售幹細胞提供給學術單位使用。

 

追蹤幹細胞是否分化?

Stem Cell Differentiation Reporter

最多種類:市售最多幹細胞專用的Reporter
效率最高:以最高效率的Lentivirus 幫你送Reporter 到幹細胞
篩選最方便:帶有Zeocine.,直接篩藥選出stable cell
觀察最方便:lineGFP 受Cell-specific promoter 調控, 藉由觀察綠色螢
光的表現與否,可以輕易的判斷幹細胞分化的趨向。

 

間葉幹細胞和Medium專賣店

Human Mesenchymal Stem cells and media

 

■ 細胞純度高於傳統的基質培養.
■ 細胞繼代培養數次後,依然能維持幹
細胞的功能和特性。
■ 比骨髓基質細胞有較好的繁衍及分化
的能力。

 

幹細胞標誌大蒐羅 Stem cell marker Overview

幹細胞培養終極密技 Extracellular Matrix (ECM) Molecules, Growth Factors, and other Factors Used to
Promote Stem/Progenitor Cell Proliferation and Differentiation In Vitro

幹細胞培養材料庫Media+Additives+Surfaces= complete Cell Environments

細胞表面具有專一性蛋白質,又稱為受體(receptor),
細胞會利用這些受體與其它分子結合,作為細胞溝通的
方式,表現於幹細胞上的受體蛋白質即被認為幹細胞標
誌。由於幹細胞在型態上並無法與其他細胞做區隔,幹
細胞標誌的發現對於定義不同種類或是時期的幹細胞就
顯得十分重要。截至目前為止,具有分化能力之多潛能
幹細胞之獨特細胞標誌仍未找到,因此,合併多種標誌
來定義特定種類的幹細胞。有了這些幹細胞標誌後,研
究人員可利用螢光抗體來尋找並鑑定哪些才是幹細胞。

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2008 第二季

訊號傳遞 Signal transduction以及蛋白質磷酸化 phosphorylation完全解決方案

磷酸化蛋白在細胞內的訊息傳遞路徑上扮演著相當重要角色,但由於磷酸化蛋白表現的時間很短暫,表現量也非常少,增加研究上困難。因此,在分析磷酸化蛋白的表現上常常都必需事先經過純化濃縮的步驟,才能偵測得到存在在細胞微忽其微的磷酸化蛋白。

目前,研究細胞內磷酸化的方法,主要是西方墨點法、免疫沉澱、體外激脢活性測定、質譜儀等生化分析技術,但這一類實驗設計侷限於分析同類型或是高同質性的細胞膜型(Homogeneous Population)。如實驗系統中若只有少數族群會作出反應,傳統生化分析將無法凸顯它們的反應強度,因為被多數的族群平均稀釋。特別是針對一個複雜化的細胞族群,如人類周邊血單核細胞、鼠類脾臟細胞、骨髓細胞等含有少量或是不同細胞類型的實驗體系。為了能夠靈敏地偵測次族群的生化反應,甚至能顧及細胞的個別差異性,研究人員紛紛採用能夠觀察單一細胞表現的技術來進行訊息傳導的研究,如流式細胞儀。

 

想一次看清訊號傳遞路徑嗎?

解決方案: Domain Arrays

Panomics Sh2, SH3, PDZ, WW Domain Arrays

 

磷酸化蛋白少得可憐嗎?

解決方案:先濃縮

Clontech TALON Phosphoprotein Enrichment Product
磷酸化蛋白純化產品

 

想測Protein kinase 活性,想測PPi 嗎? 卻又不想等嗎?

解決方案:快速冷光定量

Lonza PKLight Protein Kinase Assay Kit

 

想一次分析多種磷酸化蛋白?

解決方案:Flow cytometry

BD Pharmingen PhosFlow Antibody

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