EV 分離方法獨立比較 (2026)
作者：Allyson Markey｜2026 年 6 月 17 日
.jpg)
如果你曾經站在存放生物樣本庫血漿的冷凍櫃前，思考哪一種分離方法才能獲得真正的細胞外囊泡（EV），那麼有這種疑問的人絕對不只你一個。分離方法的選擇會帶來實質影響，包括 EV 的產率、純度，甚至後續分析能否順利進行。然而，直到最近，多數已發表的比較研究一次通常只涵蓋兩至三種方法。
Figueroa-Hall 以及其他研究人員在 2025 年發表於《Journal of Extracellular Biology》的一項新研究，進行了更廣泛的比較。研究團隊使用少量人類血漿與血清樣本，針對七種商業化及標準方法所涵蓋的五種 EV 分離策略進行比較，並著重於分離總細胞外囊泡（total EVs，TEVs）及星狀膠質細胞分泌的細胞外囊泡（astrocyte-enriched EVs，AEEVs），以應用於神經科學的生物標誌物研究。
以下是這項研究中最值得注意的發現。
產率與純度之間確實存在取捨，而且可以量化
這項研究最主要的發現：沉澱法可獲得較高濃度的 EV，管柱層析（size-exclusion chromatography，SEC）則可獲得較高純度的 EV。真正具有參考價值的是，不同方法之間的差異究竟有多大。
在以 CD63 測量血漿總 EV 時：
• ExoQuick（沉澱法）獲得最高的產率。
• SmartSEC（SEC 法）的純度為 ExoQuick 的 8.7 倍。
在血清總 EV 中：
• SmartSEC 獲得最高的產率。
• **差速超高速離心法（differential ultracentrifugation）**獲得純度最高的樣本，但是其 CD63 產率比 SmartSEC 低了 91 倍。
這些結果的重點並不是指出某一種方法是「絕對的贏家」，而是適合的方法完全取決於後續分析需求。
如果要使用 Western blot 檢測低豐度蛋白質，就會更重視產率；如果要進行質譜分析或蛋白質體學分析，而脂蛋白污染可能破壞整個分析結果，那麼就會更重視純度。
血清與血漿不能互相替代
在幾乎所有分離方法中，血清TEVs 的四跨膜蛋白濃度均高於血漿TEVs，部分結果的差異甚至可達 5～22 倍。
如果你過去將這兩種檢體基質視為相同，這篇論文提供了一項重要提醒：所選擇的生物流體種類會改變實際測量到的結果。
例外是 Norgen 與超高速離心法。無論起始材料是血清或血漿，這兩種方法得到的 EV 數量都偏低。
Proteinase K 處理並非沒有代價
Proteinase K（PK）經常用於去除與 EV 共同分離的蛋白質。然而，研究結果顯示，無論採用哪一種分離方法，PK 處理都會使 98～100% 的 CD81 與 CD9 訊號消失，而 CD63 訊號則大致得以保留。
如果研究仰賴 CD81 或 CD9 等 EV 表面標誌，在 EV 分離後使用 PK，可能會在不易察覺的情況下，使你原本想要測量的訊號大量流失。
星狀膠質細胞富集 EV 也呈現相同趨勢
研究作者從總 EV 中，以免疫捕捉方式分離 GLAST 陽性的星狀膠質細胞富集 EV（AEEVs）後，仍然觀察到相同的產率與純度取捨關係。
由 ExoQuick 分離樣本所得到的 AEEVs，具有最高的粒子濃度，以及最強的 CD81 與 GLAST 流式細胞儀訊號。相較之下，由 SmartSEC 與 qEV 分離樣本所得到的 AEEVs 濃度較低，但是純度較高。
對於利用周邊生物流體研究腦來源 EV 生物標誌物的研究人員而言，這是第一項針對這些方法所進行的直接比較研究。這個研究領域目前正快速應用於阿茲海默症、帕金森氏症及重度憂鬱症等疾病。
這些結果對分離方法的選擇有何意義
這篇論文最有價值的貢獻並不是提供一個明確的優勝結果，而是建立一套選擇方法時可使用的思考架構。在選擇 EV 分離方法之前，應先思考以下問題：
1. 後續要進行什麼分析？
四跨膜蛋白免疫分析對共同分離蛋白質的容忍度，通常高於質譜分析。
2. 使用血漿還是血清？
兩者並非相同的檢體基質，不能直接視為等效。
3. 可以使用多少樣本體積？
生物樣本庫保存的臨床樣本通常數量有限，因此經常必須選擇可處理 200～500 µL 樣本的方法。
4. 是否需要富集特定 EV 亞群？
在 EV 分離後進行免疫捕捉，可以進一步提高特定亞群的純度，但起始 EV 產率仍然非常重要。
針對需要在這些條件之間進行權衡的研究團隊，我們提供涵蓋不同 EV 分離需求的工具，包括：
• ExoQuick：適合追求高產率的沉澱法。
• SmartSEC：適合追求高純度的 SEC 法，提供 Single、適合少量樣本的 Mini，以及適合高通量操作的 HT 等規格。
• SmartSEC-DeLipo：在 SEC 分離之外加入脂蛋白去除功能，以達到蛋白質體學分析所需的純度。
• ExoQuick ULTRA：結合沉澱與後續純化的分離方法。
• ExoQuick-TC UltraPure 及 ExoQuick UltraPure：這兩項最新產品以 ExoQuick ULTRA 為基礎，加入額外的化學處理步驟以去除脂蛋白。當研究同時需要高產率與高純度時，前者可提升細胞培養液樣本的處理效果，後者則適用於血清及血漿分析流程。
完整論文採開放取用，值得進一步閱讀：
Figueroa-Hall 等人，Journal of Extracellular Biology，2025
對於如何根據樣本類型或後續應用選擇適合的 EV 分離方法仍有疑問嗎？
你可能也會對以下產品感興趣：
• SmartSEC-DeLipo™：結合 SEC 與脂蛋白去除，適合需要蛋白質體學等級純度的應用。
• SmartSEC Mini：針對 10～100 µL 少量樣本進行最佳化。
• SmartSEC HT：採用 96 孔盤格式，適合高通量操作流程。
• SmartSEC-TC：針對細胞培養液進行最佳化。
• Exo-Flow Capture Kit：利用磁珠免疫捕捉方式富集特定 EV 亞群。
資料來源
• System Biosciences. What a New Independent Comparison Tells Us About EV Isolation Methods. 17 June 2026. https://www.systembio.com/what-a-new-independent-comparison-tells-us-about-ev-isolation-methods/
• Figueroa-Hall LK et al. Comparison of Methods for Isolation and Characterization of Total and Astrocyte-Enriched Extracellular Vesicles From Human Serum and Plasma. Journal of Extracellular Biology. 2025;4(2):e70035. doi:10.1002/jex2.70035.
本文僅供研究使用。
熱門文章
