COVID-19 病毒檢測／快篩：分子檢測 (RT-qPCR)
COVID-19 疫情蔓延全球，準確及時地檢測出新冠病毒至關重要。抗原抗體的檢測儘管可快速、簡便地得到結果，但通過 RT-qPCR方法進行核酸檢測，仍然是判斷疑似病例或患者是否攜帶病毒、是否具有傳染性的“Gold Standard”。
RT-qPCR
核酸檢測法為目前偵測新冠病毒的主要方法之一，利用即時定量反轉錄聚合酶連鎖反應 (real-time RT-PCR) 來檢測採集的檢體中是否有SARS-CoV-2病毒。檢測的實驗流程大致上分成三步驟：樣本採集、核酸分析、RT-qPCR。
推薦工具：Zymo Research DNA/RNA Shield
室溫保存及運送樣本，抑制病毒活性給您絕對的安全！
樣品保存專家 Zymo Research DNA/RNA Shield 以可去除病毒活性並完整保留病毒遺傳物質 (核酸) 而聞名。除了 試劑版本 供一般學術研究用，另也以多種採檢套組形式如 Swab Collection Tubes、Saliva Collection Kit、Fecal collection tubes 及 Blood Collection Tube 提供給大家，有效避免檢驗人員暴露於病毒感染風險之中。
DNA/RNA Shield 能在室溫下保存 DNA & RNA > 30天，其抑制病毒活性的能力獲得德國 EUROVIR® Hygiene-Labor GmbH 第三方實驗室證實、符合歐洲 EN 14476:2017 規定且遵守美國 CDC 規範，採檢及運輸過程都安心不用怕！
另外，使用DNA/RNA Shield 保存的樣本後續可直接搭配 RNA 純化試劑，不需要額外的移除或沉澱步驟，省時省力！
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應用 |
品名 |
貨號 |
包裝 |
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樣本採集 |
R1106 |
10 pack |
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R1107 |
50 pack |
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R1108 |
10 pack |
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R1109 |
50 pack |
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R1101 |
10 pack |
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R1210 |
1 Unit |
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R1150 |
50 pack |
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R1100-250 |
250 ml |
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R1100-50 |
50 ml |
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R1200-125 |
125 ml |
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R1200-25 |
25 ml |
推薦工具：Zymo Research Virus RNA Extraction Kits
獨家 spin column，旋轉就能等到零汙染、高品質、產量佳 RNA
Zymo Research Quick-RNA Viral kits (column, 96-well, magbead)：高品質的核酸萃取，實驗只需 10 分鐘；Magbead 版本能與 Thermo, Tecan, Hamilton 自動化核酸萃取儀搭配。
Zymo Research Direct-zol RNA kits，純化只要 7 分鐘，發表於國際知名期刊 The Lancet 的新冠肺炎研究團隊使用此產品 (Lancet 2020 citation)！
| 應用 | 品名 | 貨號 | 包裝 |
| RNA 萃取 | Quick RNA Viral ™ Kit | R1034 | 50 Preps |
| R1035 | 200 Preps | ||
| Quick-RNA Viral 96™ Kit | R1040 | 2 x 96 Preps | |
| R1041 | 4 x 96 Preps | ||
| Quick-DNA/RNA Viral MagBead 可搭配自動化核酸萃取儀 (Thermo, Tecan, Hamilton) |
R2140 | 96 preps | |
| R2141 | 4 x 96 Preps | ||
| Direct-zol™ RNA MiniPrep | R2050 | 50 Preps | |
| R2052 | 200 Preps |
推薦工具：Implen NanoPhotometer
德國工藝、專利設計、儀器終身不需校正、結果再現性佳
Sample Compression Technology
獨家樣品抑制技術，將樣品溶液限制於樣品槽上方，不必擔心蒸發影響，黏稠或易揮發性樣品皆可使用
True Path Technology
獨家免校正光徑技術，確保光徑永遠固定，儀器終身無需校正
多款機型可供選擇
插播速報
COVID-19 正在印尼迅速擴散中，根據印尼政府發布的數字，印尼目前是整個東南亞 COVID-19 確診病例數最高的國家之一。為了防止進一步傳播並促進社區中 COVID-19 的檢測，印尼國家情報局/ Badan Intelijen Negara (BIN) 建立了用於 COVID-19 檢測的移動實驗室，這台移動車上載著精密儀器－Implen N50-Touch 進行病毒 RNA 濃度偵測。
Real-Time PCR 是通過檢測反應體系中的螢光強度來確認 PCR 擴增產物的量，而螢光偵測的方式主要分成螢光嵌合法 (Dye-based, 常見的 dye 有 SYBR Green、TB Green 等) 及 螢光探針法 (Probe-based) 兩大類。螢光探針針法的專一性高，能針對多組基因同時偵測，是此次 COVID-19 疫情選用的方法。
德國柏林 Charité 大學醫院病毒研究所在疫情初期根據公布的病毒序列數據，設計出針對病毒 RNA-dependant RNA polymerase (RdRp), Envelope (E), Nucleocapsid (N) 基因 的 primers & probes，可鑑別檢測 SARS-CoV 2 病毒。該團隊將此方法提供給 WHO 及各國實驗室，包括台灣疾病管制署一開始構建檢測方法是依此為參考依據，疫情初始用此方法診斷 COVID-19。陸續各國皆有分離新的 SARS-CoV-2 病毒株，並將其基因序列上傳至 Global Initiative on Sharing All Influenza Data (GISAID)，因此國際間各個單位皆有發表檢測 SARS-CoV-2 所使用的 primers 與 probes。
(圖片來源：GeneTex 網站)
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機構 |
偵測基因 |
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US CDC, USA |
Three targets in N gene |
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Charité, Germany |
RdRp, E |
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National Institute of Infectious Disease, Japan |
Pancorona and multiple targets, Spike protein |
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HKU, Hong Kong SAR |
ORF1b-nsp14, N |
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National Institute of Health, Thailand |
N |
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Institut Pasteur, Paris, France |
Two targets in RdRp gene |
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China CDC, China |
ORF1ab, N |
* Charité 機構後來更改只針對 RdRp, E 基因進行檢測
推薦工具１：Biosearch Technologies Primers & BHQ/BBQ-Probes
真正的 Quencher，S/N ratio 最低！
由 Biosearch Technologies 發明的 Black Hole Quencher (BHQ™) 及 Black Berry Quencher (BBQ-650™) dyes 為真正的 Quencher，不產生螢光，能量轉移的效能最佳。美國 CDC 推薦使用Biosearch 專利 BHQ probes 作為新冠肺炎的檢測。
| Primers & Probes | |||||
| 品名 | 反應數 | 偵測基因 | 純化方法 | 濃度 | 選購單一基因 |
| WHO COVID-19 primer/probe set | 2,000 | RdRP, E Sarbeco | Probe: RP HPLC Primer: Salt Free |
Probe: 10 nmol Primer: 20-40 nmol |
可 |
| USA COVID-19 primer/probe set | 2,000 | N1, N2, N3, RNase P | Probe: RP HPLC Primer: RPC |
Probe: 10 nmol Primer: 1.25-22 nmol |
可 |
| 2019-nCoV CDC-qualified Probe and Primer Kits for SARS-CoV-2 | 1,000 | N1, N2, RNase P | Probe: Dual HPLC Primer: AX HPLC |
Probe: 2.5 nmol Primer: 10 nmol Tube: premix 22.5 nmol |
不可，只能購買一整套 |
| #美國 CDC 驗證 | |||||
| ValuPanel: 2019-nCoV US CDC | 10,000 | N1, N2, N3, RNase P | Probe: Dual HPLC Primer: AX HPLC |
Probe: 25 nmol Primer: 100 nmol |
可 |
| 100,000 | Probe: 100 nmol Primer: 1000 nmol |
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| ValuPanel: Charité labeled with BBQ-650 (Blackberry) | 2,000 | RdRP, E Sarbeco | Probe: Dual HPLC Primer: AX HPLC |
Probe: 5 nmol Primer: 20 nmol |
可 |
| 10,000 | Probe: 25 nmol Primer: 100 nmol |
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| 100,000 | Probe: 100 nmol Primer: 1000 nmol |
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| ValuPanel: Charité labeled with BHQ | 2,000 | RdRP, E Sarbeco | Probe: Dual HPLC Primer: AX HPLC |
Probe: 5 nmol Primer: 20 nmol |
可 |
| 10,000 | Probe: 25 nmol Primer: 100 nmol |
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| 100,000 | Probe: 100 nmol Primer: 1000 nmol |
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推薦工具２：Takara Bio One-Step RT-qPCR Kits
高靈敏度、高擴增效率、高特異性，非常適合微量病毒RNA的檢測
Takara Bio One-Step RT-qPCR 相關產品的優勢在於採用 PrimeScript 系列反轉錄酶和高效能的 TaKaRa Ex Taq HS，帶出穩定高效的實驗結果，針對微量的 viral RNA (pg 等級) 也能進行偵測，大大提升檢測準確度！此外，實驗過程皆為單管操作，樣本不會在轉換過程中損失，降低汙染的可能治癒，檢測人員也免於多次接觸樣本的風險。
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應用 |
品名 |
貨號 |
包裝 |
說明 |
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One-Step RT-qPCR Kit |
One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) # 中國 CDC 使用此產品發表文獻於 NEJM 期刊 # 美國 FDA EUA 指定的 CDI Enhanced COVID-19 Test 中被 Hackensack University Medical Center使用 |
RR064A |
100 Rxns |
通用版: 靈敏度高、特異性高、擴增效率佳 適合微量 RNA 樣本來源，如病毒 RNA |
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RR064B |
500 Rxns |
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One Step PrimeScript™ III RT-PCR Kit # 在發表文獻中，於偵測下限的測試比較較其他三家的酵素 (Qiagen QuantiFast / Thermo TaqPath / Thermo Taqman Fast) 表現更好！ |
RR600A |
200 Rxns |
2X Premix 版本 新版 PrimeScript III 反轉錄酶具 inhibitor resistant 特性，適合實驗中有 RT-qPCR inhibitors (如 heparin, humic acid 等) 殘留的樣本 |
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RR600B |
1000 Rxns |
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PrimeDirect™ Probe RT-qPCR Mix # 使用於美國 FDA EUA 指定的Ipsum Diagnostic, LLC COV-19 IDx assay |
RR650A |
200 Rxns |
2X Premix 版本 新版 PrimeDirect 反轉錄酶具 inhibitor resistant 及 thermoresistant 特性，除了適合實驗中有 RT-qPCR inhibitors 殘留的樣本，連 crude extract 或未純化的樣本也能直接做 |
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RR650B |
1000 Rxns |
推薦工具３：Zymo Research COVID-19 Detection Kit
美國 FDA-Emergency Use Authorization (EUA, 緊急授權使用)，僅 7 分鐘手動操作
若是想要一整組的檢測試劑，貼心的 Zymo Research 推出一整套含有 primers & probes、RT-qPCR 試劑、positive/negative control 的產品 Quick SARS-CoV-2 rRT-PCR Kit，免除東湊西湊的煩惱！
偵測 N 和 RNase P 基因
Limit of Detection (LOD): 15 copies/reaction
相容於可以偵測 HEX 或是 Quasar® 670/Cy5 fluorophores 的 qPCR 機器
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應用 |
產品 |
貨號 |
包裝 |
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COVID-19 Detection Kit |
Quick SARS-CoV-2 rRT-PCR Kit |
R3011 |
100 rxns |
V. Real-Time PCR 儀器
說到做 Real-Time PCR，怎麼能少了最重要的機器呢？在疫情的檢測上，能夠同時偵測大量樣本的機器才是首選！
推薦工具：Azure Biosystems Cielo Real Time PCR System
96-well 經濟實惠高 CP 值儀器
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創新的光纖系統，具有更高的激發和檢測效率
無需使用 passive reference dyes (例如ROX 等) 做 inter-well normalization
專為各種 qPCR 應用而設計，具有高靈敏度和寬廣的 dynamic range
內建 10.2 吋 觸控螢幕，圖像化操作流程，實驗流程設置簡單易上手
可靠的光學元件和 thermal block 設計，在連續 1000 次 qPCR 實驗後，依然可提供相同的均勻性和可重複性數據
無需外接電腦即可運行實驗，數據經由網路、LAN、Wi-Fi 或 USB 傳輸
與市面上大多數的 qPCR 試劑與耗材相容
可以執行 Fast program (~20 minutes) 與 Standard program (~90 minutes)
兩種機型可選擇
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應用 |
品名 |
貨號 |
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Real Time PCR 儀器 |
Azure Cielo 3 real time PCR |
AIQ030 |
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Azure Cielo 6 real time PCR |
AIQ060 |
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